Очистка конъюгатов

Во всех перечисленных методах реакционная смесь наряду с конъюгатами различной молекулярной массы содержит непрореагировавшие исходные компоненты, а в некоторых случаях и их полимеры. Для выделения из конъюгата наиболее активной фракции обычно используют гель-хроматографию на сефадексе G-200, ультрагеле АсА-44, сефакриле S-300 и др.

Для пероксидазных конъюгатов устранение избытка свободного фермента осуществляют с помощью высаливания 50 % сульфатом аммония или аффинной хроматографией на белок А-сефарозе [10]. Удаление свободных IgG может быть осуществлено аффинной хроматографией на конканавалин А-сефарозе [10]. При этом необходимо помнить, что пероксидаза, окисленная периодатом натрия, не взаимодействует с конканавалином А, следовательно этот способ очистки нельзя применять для периодатных конъюгатов. Кроме того, небольшое количество IgG (около 5 %) взаимодействует с конканавалином А [6], поэтому перед конъюгированием IgG следует пропустить через колонку с конканавалином А.

Необходимость проведения стадии очистки конъюгата во многом зависит от способа его получения. Обязательно следует чистить конъюгаты, полученные с помощью гомобифункциональных сшивающих реагентов, т.к. их выходы очень низки. Как правило подвергают очистке конъюгаты, полученные с помощью других методов, хотя в них степень гомогенности и выход целевого продукта значительно выше. Пероксидазные конъюгаты, полученные периодатным методом, по нашим данным, можно использовать без очистки. Это обусловлено тем, что вступают в реакцию до 70 % пероксидазы и более 90 % IgG . Свободная пероксидаза не приводит к значительному увеличению фонового сигнала при использовании такого промывного раствора, как натрий-фосфатный буфер, рН 7,2 - 7,4, содержащий 0,65М NaCl и 0,05 % твина-20.

Назад

Регистрационные удостоверения
Награды сотрудников отдела
  • Лучший доклад молодых ученых «Новые концепции механизмов воспаления, аутоиммунного ответа и развития опухоли» V Международной научно-практической конференции. Государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образован
  • Диплом победителя конкурса «Лучшая работа молодого ученого» Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов Роспотребнадзора «Актуальные проблемы эпидемиологии и профилактической медицины», г. Ставрополь, 22 – 24 октября 2014 г
  • Диплом «Победитель конкурса грантов Санкт-Петербурга для студентов, аспирантов, молодых ученых, молодых кандидатов наук 2014 г.»
  • Победитель Конкурса грантов Санкт-Петербурга для студентов, аспирантов, молодых ученых, молодых кандидатов наук 2010 г. Махлай Наталья Сергеевна
  • Победитель XIV Конкурса бизнес-идей, научно-технических разработок и научно-исследовательских проектов Молодые, дерзкие, перспективные. Ольга Валентиновна Заручейнова
  • Финалист XIV Конкурса бизнес-идей, научно-технических разработок и научно-исследовательских проектов Молодые, дерзкие, перспективные. Наталья Сергеевна Махлай
  • Победитель программы Участник молодежного научно-инновационного конкурса (УМНИК). Васильева Елена Викторовна. НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера
ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий
Факс
(812) 313-69-89
(812) 233-17-03