Ускоренная идентификация микобактерий с помощью лазерной флюоресценции

Основным недостатком традиционных методов диагностики микобактерий является длительность выделения и индикации возбудителя. Современные ускоренные методы идентификации микобактерий, такие как молекулярно-генетические, хроматографические, автоматизированные системы культивирования и идентификации (BACTEC MGIT 960), иммунологические наряду с преимуществами имеют также ряд недостатков, которые существенно ограничивают возможность широкого применения их в практической лабораторной диагностике микобактериальных инфекций. Это применение дорогостоящих расходных материалов, оборудования, необходимость в высококвалифицированных специалистах, помещения. Для проведения этих исследований необходима лабораторная служба, удаленная от объекта исследования, что не соответствует современному требованию диагностики "по месту лечения". Кроме того, представленные методы не позволяют проводить индикацию и дифференциацию живых и мертвых микробов, что значительно снижает диагностическую ценность лабораторных методов. Поэтому поиск новых, качественных, ускоренных и лишенных указанных недостатков методов диагностики микобактерий обоснован и актуален.

В связи с этим, авторы статьи обратили внимание на принципиально новый экспресс-метод идентификации микробов – лазерно-флюоресцентный. В своей основе лазерно-флюоресцентная диагностика (ЛФД) использует способность специфических органических молекул биологического субстрата флюоресцировать при поглощении излучения видимого и ультрафиолетового диапазона. Однако метод ЛФД до настоящего времени не был теоретически, экспериментально и методически обоснован для индикации и идентификации M.tuberculosis complex и нетуберкулезных микобактерий.

Цель исследования – разработка ускоренного метода идентификации микобактерий на основе лазерной флюоресценции.

Исследованы особенности лазерно-индуцированной флюоресценции 19 видов бактерий, в том числе 17 видов микобактерий. Идентификация микроорганизмов проведена с помощью измерения спектрально-флюоресцентной характеристики. Создана библиотека спектрально-флюоресцентных характеристик микобактерий в различных концентрационных и ассоциативных соотношениях, которая явилась основой базы данных для идентификации микобактерий лазерно-флюоресцентным методом. Разработаны принципы диагностического алгоритма индикации и дифференциации микобактерий на основе этого метода. Для повышения интенсивности флюоресценции микобактерий показан эффект мирамистина, учет рассеивающих характеристик среды для корректировки спектральных характеристик микобактерий и обработка результатов исследования факторным анализом. При этом эффективность метода составляет 80 - 90 %.

Разработанные принципы ускоренной идентификации микобактерий и их ассоциаций на основе лазерно-флюоресцентного метода экспериментально обоснованы и апробированы на неизвестных культурах микобактерий и объективно доказывают возможность использования этого метода для экспресс-идентификации микобактерий комплекса M.tuberculosis и нетуберкулезных микобактерий. (См. статью: Иванова М.А. с соавт. "Ускоренная идентификация микобактерий с помощью лазерной флюоресценции").

"Журн. микробиол", 2009, № 3, с. 81 - 85.