Создание иммунохимических реагентов для выявления CagA-антигена Helicobacter pylori и антител против него

19.10.2010

Инфекция бактерией Helicobacter pylori вызывает развитие в слизистой желудка воспалительного процесса, который в большинстве случаев протекает в форме хронического гастрита. В ряде случаев (до 20%) инфекция приводит к возникновению острого гастрита, язвенной болезни, аденокарциномы желудка и MALT-лимфомы. Наиболее выраженные патологические процессы, сопряженные с повышенной вероятностью опухолевой трансформации, вызывают штаммы H.pylori, экспрессирующие цитотоксин CagA.

До сих пор остаются неизученными свойства CagA-белка как антигена: не выяснена иммуногенность различных эпитопов молекулы, не исследован изотипический спектр антител, вырабатываемых против этого белка.

По заключению ряда экспертов, в том числе III Маастрихтской конференции, для диагностики инфекции H.pylori рекомендуется использовать комплекс иммунологических и молекулярно-биологических методов. Поскольку CagA-белок является маркером высокопатогенных штаммов H.pylori, разработка методов иммунодетекции CagA-антигена и антител против него представляется актуальной проблемой клинической иммунологии. Решение этой проблемы сдерживается отсутствием стандартизованных препаратов антигена CagA и моноклональных антител (МКАТ) против него. До сих пор не существует эффективной технологии выделения и очистки белка CagA из культур H.pylori, что препятствует получению и аттестации МКАТ против этого антигена.

Цель работы состояла в создании иммунохимических реагентов – антигенов и моноклональных антител – для выявления Cag A-белка H.pylori и антител против него.

На основании in silico анализа в молекуле цитотоксина CagA выделено три качественно различные области, из которых N-концевая высоко консервативна и низкоиммуногенна, центральная – консервативна и обладает высокой иммуногенностью, а С-концевая характеризуется высокой вариабельностью и низкой иммуногенностью.

Сконструированы четыре штамма Escherichia coli, продуцирующие рекомбинантные фрагменты белка CagA. Фрагменты воспроизводят структуру высоко- и низкоиммуногенных областей молекулы CagA и в совокупности представляют всю аминокислотную последовательность белка. Рекомбинантные фрагменты CagA позволяют выявлять сывороточные антитела против цитотоксина, исследовать их изотипический состав и специфичность в отношении различных участков молекулы белка CagA. Впервые созданы штаммы гибридом-подуцентов моноклональных антител против высоко- и против низкоиммуногенных участков молекулы CagA. Моноклональные антитела распознают четыре изолированных линейных эпитопа и реагируют как с рекомбинантными полипептидами, так и с нативным белком CagA H.pylori. Моноклональные антитела (1Н1, 1Н11 и 3Н7) позволяют дифференцировать CagA-позитивные и CagA-негативные штаммы H.pylori методом иммуноблоттинга. Антитела 1Н11 и 3Н7 составляют комплементарную пару для определения белка CagA методом двухцентрового иммуноферментного анализа. (См. диссертацию “Создание иммунохимических реагентов для выявления CagA-антигена Helicobacter pylori и антител против него”).

Климович А.В. Автореф. дис. канд. биол. наук. СПб, 2010.

Все новости
Регистрационные удостоверения
Награды сотрудников отдела
  • Лучший доклад молодых ученых «Новые концепции механизмов воспаления, аутоиммунного ответа и развития опухоли» V Международной научно-практической конференции. Государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образован
  • Диплом победителя конкурса «Лучшая работа молодого ученого» Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов Роспотребнадзора «Актуальные проблемы эпидемиологии и профилактической медицины», г. Ставрополь, 22 – 24 октября 2014 г
  • Диплом «Победитель конкурса грантов Санкт-Петербурга для студентов, аспирантов, молодых ученых, молодых кандидатов наук 2014 г.»
  • Победитель Конкурса грантов Санкт-Петербурга для студентов, аспирантов, молодых ученых, молодых кандидатов наук 2010 г. Махлай Наталья Сергеевна
  • Победитель XIV Конкурса бизнес-идей, научно-технических разработок и научно-исследовательских проектов Молодые, дерзкие, перспективные. Ольга Валентиновна Заручейнова
  • Финалист XIV Конкурса бизнес-идей, научно-технических разработок и научно-исследовательских проектов Молодые, дерзкие, перспективные. Наталья Сергеевна Махлай
  • Победитель программы Участник молодежного научно-инновационного конкурса (УМНИК). Васильева Елена Викторовна. НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера
ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий
Факс
(812) 313-69-89
(812) 233-17-03