Иммунологические методы в дифференциальной диагностике активного туберкулеза легких и латентной туберкулезной инфекции

Е.В. Васильева, В.Н. Вербов, Арег А. Тотолян.

Введение

Для предупреждения распространения туберкулеза (ТБ) большое значение имеет своевременная и достоверная диагностика. Перспективным направлением для совершенствования методов клинической диагностики туберкулеза является идентификация биомаркеров в венозной крови. Цель исследования – поиск информативных иммунологических маркеров и разработка алгоритма, позволяющего дифференцировать активный ТБ легких от латентной туберкулезной инфекции.

Материалы и методы исследования

В исследование были включены больные (n=47) туберкулёзом лёгких, сотрудники противотуберкулезных учреждений (n=30), не имеющие клинических и радиографических признаков активного туберкулёза легких, и 85 условно-здоровых людей. Группу сравнения составили лица (n=20) с заболеваниями легких нетуберкулезной этиологии (НЗЛ).

Всем лицам, включенным в исследование, определяли содержание в плазме крови неоптерина и выполняли "QuantiFERON-TB Gold In-Tube" (КФТ). Помимо IFNγ мы определяли спонтанную (NIL) и антигениндуцированную (AG) продукцию 12 аналитов (EGF, MIP-1β, VEGF, IL-2, IL-4, IL-6, IL-1α, IFNα2, TGFα, TNFα, sIL-2Rα, sCD40L) с помощью технологии xMap и IP-10 иммуноферментным методом.

Уровень специфических антител класса IgG (ПТА) к природному лизатному антигену PPDN-3 (ИФА-анти-ТУБ, Россия) и к рекомбинантным химерным антигенам «CBD-CFP10», «CBD-ESAT6», «ESAT6-CFP10» и «CBD-P38» определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа.

Результаты обрабатывали с использованием пакетов MS Excel, Prizm 5.0 (GraphPad Software Inc.), JMP 9.0., критериев Манна-Уитни (сравнение независимых параметров), Вилкоксона (зависимые параметры), построения ROC-кривых и других методов.

Результаты

Положительные результаты КФТ наблюдались: в группе больных ТБ у 36 из 47 обследованных (77 %), в группе здоровых доноров – у 12 из 85 обследованных (14 %), в группе контактных - у 21 из 30 обследованных (70 %).

Чувствительность (Ч) теста составила 77 %. Специфичность (С) теста зависела от группы сравнения и составила 86 % при сравнении больных и здоровых доноров, а при сравнении больных и контактных – 30 %.

В группе больных НЗЛ было получено 30 % ложноположительных результатов.

При выполнении КФТ в динамике после двухмесячного курса проведенной терапии было установлено значимое снижение уровня IFNγ_AG-NIL (p=0,002), что коррелировало с положительной динамикой рентгенологических изменений в легких.

В результате проведения мультиплексного анализа было установлено, что IP-10_AG-NIL (пороговое значение 1087 пг/мл) и IL-2_AG-NIL (пороговое значение 36 пг/мл) являются биомаркерами, альтернативными IFNγ_AG-NIL, которые позволяют работать в более широком диапазоне определяемых концентраций.

Построение дерева решений в программе JMP 9.0 позволило выбрать три наиболее значимых маркера: IFNγ_AG-NIL, TGFα_NIL и IL-6_AG, комбинированное определение которых позволило выявить 96,3 % (26 из 27) случаев активного туберкулеза и 80,7 % (21 из 26) случаев ЛТБИ.

Также было установлено, что комбинация двух антигенов PPDN-3 и CBD-P38 наименее снижает специфичность выявления ЗЛ (76 %), при этом чувствительность в разных группах возрастает, достигая 90 % в группе БЛ хроническим ТБ процессом (МБТ+), 74 % у БЛ впервые выявленным ТБ (МБТ+) и 60 % у БЛ (МБТ-) вне зависимости от характера процесса.

Обсуждение и выводы

В докладе обсуждается значимость иммунологических методов в диагностике ТБ. На основании полученных результатов нами предложен двухступенчатый алгоритм иммунологической диагностики ТБ. На первом этапе предлагается проводить количественное измерение специфической продукции IFNγ, IP-10 или IL-2, тем самым выявляя контингент лиц, инфицированных микобактериями. На втором этапе, для определения активности ТБ процесса, применять комбинацию IFNγ, TGFα и IL-6 или определять содержание НПТ и ПТА в сыворотке крови.

Все публикации