Применение поляризационного флуоресцентного иммуноанализа с использованием синтетических пептидов ESAT-6 для определения антител в сыворотке крови больных туберкулезом легких

Е.В. Васильева, В.Н. Вербов, С.А. Еремин, И.А. Перемолотова, А.А. Колобов, Арег А. Тотолян.

Метод поляризационного флуоресцентного иммуноанализа (ПФИА) является одним из современных и перспективных видов иммуноанализа. Главные его достоинства - экспрессность, высокая чувствительность и специфичность, малое количество исследуемого образца, отсутствие стадии пробоподготовки, полная автоматизация качественного и количественного анализа. За рубежом ПФИА хорошо известен и широко используется как для мониторинга лекарственных средств, так и в контроле за употреблением наркотических и одурманивающих веществ. Упоминания о разработке ПФИА для диагностики туберкулеза (ТБ) у людей к настоящему времени не встречается. Цель работы заключалась в изучении возможностей применения ПФИА при разработке тестов для диагностики ТБ.

Результаты

Методом компьютерного моделирования иммунодоминантный белок Mycobacterium tuberculosis ESAT-6 был разбит на фрагменты с областью перекрывания 9 аминокислотных остатков. Для выделенных фрагментов были синтезированы 18 пептидов. Длина каждого пептида составляла 13 - 15 аминокислотных остатков. На основе полученных пептидов были получены трейсеры с флуоресцеинизотиоционатом.

После проведения очистки методом ТСХ было выделено по одной основной фракции из каждой реакционной смеси с Rf 0,01, подобрано оптимальное разведении трейсера и сыворотки, и проведен ПФИА с положительным и отрицательным пулом сывороток крови больных туберкулезом на основании результатов ИФА с применением рекомбинантного белка ESAT-6. В результате были выбраны 7 трейсеров, для которых разница между поляризацией положительного и отрицательно пула была максимальна, и повторили анализ с отдельными сыворотками. Результаты тестирования выявили трейсер, применение которого при выбранном пороговом значении позволило правильно идентифицировать 7 из 10 больных (чувствительность 70 %) и 9 из 10 здоровых (специфичность 90 %), p=0,011. Данный подход может быть использован для разработки экспресс-теста для диагностики ТБ.

Все публикации

Регистрационные удостоверения
Награды сотрудников отдела
  • Лучший доклад молодых ученых «Новые концепции механизмов воспаления, аутоиммунного ответа и развития опухоли» V Международной научно-практической конференции. Государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образован
  • Диплом победителя конкурса «Лучшая работа молодого ученого» Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов Роспотребнадзора «Актуальные проблемы эпидемиологии и профилактической медицины», г. Ставрополь, 22 – 24 октября 2014 г
  • Диплом «Победитель конкурса грантов Санкт-Петербурга для студентов, аспирантов, молодых ученых, молодых кандидатов наук 2014 г.»
  • Победитель Конкурса грантов Санкт-Петербурга для студентов, аспирантов, молодых ученых, молодых кандидатов наук 2010 г. Махлай Наталья Сергеевна
  • Победитель XIV Конкурса бизнес-идей, научно-технических разработок и научно-исследовательских проектов Молодые, дерзкие, перспективные. Ольга Валентиновна Заручейнова
  • Финалист XIV Конкурса бизнес-идей, научно-технических разработок и научно-исследовательских проектов Молодые, дерзкие, перспективные. Наталья Сергеевна Махлай
  • Победитель программы Участник молодежного научно-инновационного конкурса (УМНИК). Васильева Елена Викторовна. НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера
ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий
Факс
(812) 313-69-89
(812) 233-17-03