Разработка диагностикума эритроцитарного шигеллезного Флекснера VI

О.Ю. Кузнецова, В.Н. Вербов, В.Л. Львов.

Кафедра молекулярной биотехнологии, e-mail: olgakuznetsova994@gmail.com.

Ежегодно общее число случаев шигеллезов в мире оценивается в 165 млн. Почти 69 % всех случаев заболевания и 61 % всех летальных исходов приходится на группу детей младше 5 лет. Серологические методы подтверждения дизентерии являются ускоренными методами диагностики. Один из таких методов - реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) [1].

Цель работы заключалась в разработке эритроцитарного О-антигенного диагностикума для выявления специфических антител к шигеллам Флекснера VI.

Диагностикум был получен путем сенсибилизации акролеинизированных эритроцитов кур хроматографически очищенным липополисахаридным О-антигеном шигелл Флекснера VI в 0,01 М фосфатном буферном растворе, рН — 7,2 ± 0,2 (ФБР). Приготовление раствора антигена осуществлялось 2 методами, позволяющими повысить его сенсибилизирующую активность:

растворение навески сухого антигена в ФБР с последующей дробной стерилизацией в автоклаве текучим паром при 100 °С, давлении 0,9 атм. по 30 мин. в течение 3 дней;
растворение навески сухого антигена в 8 М растворе мочевины с последующим нагреванием в кипящей воде до полного растворения хлопьев антигена.

Специфическая активность диагностикумов, полученных из различным образом активированных антигенов, определялась методом РПГА с использованием 2 сывороток.

Сыворотка диагностическая шигеллезная Флекснера VI адсорбированная сухая для РА «Агнолла» в разведении 1:10 (С.-Петербургский НИИВС).
Сыворотка диагностическая шигеллезная Флекснера VI неадсорбированная сухая из набора реагентов «Диагностикум эритроцитарный шигеллезный Флекснера VI антигенный», в разведении 1:100 (С.-Петербургский НИИВС).

Титры сывороток при постановке с обоими диагностикумами совпали (1:1280 и 1:6400 соответственно). Это позволяет ввести в технологический процесс изготовления диагностикума активацию антигена 8 М раствором мочевины.