Результаты
Положительные результаты КФТ были получены у 36 из 54 больных ТБ, у 26 из 47 контактных лиц и у 8 из 43 условно здоровых лиц. Таким образом, чувствительность теста КФТ при выявлении ТБ инфицирования составила 67 % при обследовании больных ТБ и 55 % при обследовании контактных по ТБ лиц. Специфичность теста – 81 %. Демографическая и клиническая информация обследованных приведена в таблице 1.
Таблица 1. Клиническая и демографическая характеристика обследованных.
| Больные ТБ лёгких n=54 |
Лица, контактные по ТБ n=47 |
Условно здоровые доноры n=43 |
|
|---|---|---|---|
| Возраст, Me [Q1;Q3] | 38 [30; 46] | 48 [36; 56] | 28 [25; 41] |
| Возраст, min-max | 18 - 76 | 25 - 73 | 18 - 57 |
| Мужчины/женщины, % | 52/48 | 22/78 | 55/45 |
| КФТ+, % | 67 | 55 | 19 |
| МБТ+, % | 81 | – | – |
Примечание:
КФТ+ – положительный результат в тесте КФТ;
МБТ+ – микробиологически подтвержденное (посев мокроты) наличие бактериовыделения.
1. Поиск альтернативных биомаркеров для выявления ТБ инфицирования
В настоящее время КФТ, основанный на определении IFNγAG-NIL, является почти единственным методом выявления ТБ инфицирования. Мы поставили задачу выявить дополнительные биомаркеры, которые также могут использоваться для ответа на этот вопрос. Для этого у 144 обследованных определяли продукцию 12 цитокинов (см. "Материалы и методы") и сравнивали полученные значения с результатами теста КФТ (в случае IP-10 исследования проводили только у 48 пациентов). Из 12 проанализированных показателей высокая корреляционная связь с IFNγAG-NIL была отмечена только для IL-2 (r=0,79; p<0,0001) и IP-10 (r=0,71; p<0,001). Графическое представление данных при сравнении двух групп КФТ+ (n=70) и КФТ- (n=74) приведено на рисунке 1.
Рисунок 1
Примечание. Диапазонами показана медиана и максимальное/минимальное значение. Пунктирной линией обозначено пороговое значение: IFNγAG-NIL 14 пг/мл (0,35 МЕ/мл ), IP-10AG-NIL 1087 пг/мл, IL-2AG-NIL 36 пг/мл.
В группе КФТ+, по сравнению с группой КФТ-, выявлены достоверно повышенные уровни IL-2AG-NIL (107,8 [36,7; 229,2] против 0,0 [0,0; 3,4] пг/мл, p<0,0001) и IP-10AG-NIL (1185 [1108,0; 1795,0] против 283,0 [106,0; 855,5] пг/мл, p<0,001). Для сравнения информативности определения IP-10AG-NIL и IL-2AG-NIL были построены характеристические ROC-кривые (рисунок 2), определены оптимальные пороговые значения IL-2 и IP-10 и рассчитаны основные диагностические показатели: чувствительность и специфичность. Проведенный анализ показал, что тест с IP-10 уступает тесту с IL-2 по ППК: 0,84 (ДИ 0,71 - 0,96) против 0,93 (0,88 - 0,97), выбранное пороговое значение 1087 пг/мл для IP-10 обеспечивает чувствительность выявления ТБ инфицирования 82 % (ДИ 48 - 98) и специфичность 81 % (ДИ 65 - 92), в то время как тест с IL-2 при пороговом значении 36 пг/мл имеет сопоставимую чувствительность 77 % (ДИ 66 - 86), но более высокую специфичность 97 % (ДИ 91 - 99). При этом существенным преимуществом IP-10 является больший диапазон измеряемых концентраций по сравнению с IL-2 и IFNγ и высокое пороговое значение 1087 пг/мл против 36 пг/мл (IL-2) и 14 пг/мл (0,35 МЕ/мл) для IFNγ.
Рисунок 2
2. Поиск биомаркеров, позволяющих проводить дифференциальную диагностику активного ТБ и ЛТБИ
Следующая цель исследования заключалась в поиске биомаркеров, позволяющих проводить дифференциальную диагностику активного ТБ и ЛТБИ. Для этого мы проанализировали результаты определения 12 цитокинов у больных активным ТБ легких (диагноз подтвержден микробиологически) (n=27) и контактных лиц с ЛТБИ (n=26). Результаты представлены в таблице 2. Группа контактных лиц с положительным результатом КФТ и больные активным ТБ различались по концентрации в плазме крови следующих цитокинов: sIL2-RαNIL, sIL2-RαAG, sIL2-RαAG-NIL, IFN-γAG, IFN-γAG-NIL, IL-6NIL, IL-6AG, TGFαNIL, TGFαAG, IFN-α2AG, TNFαAG. Анализ характеристических кривых при фиксированном значении специфичности 81 % показал, что ни один из биомаркеров не обладал чувствительностью (> 70 %), что исключало возможность их изолированного использования с диагностической целью.
Таблица 2. Сравнительная характеристика показателей спонтанной и антигениндуцированной продукции цитокинов у больных активным ТБ и контактных лиц с ЛТБИ.
| Показа- тель |
Больные активным ТБ (n=27), МE [min; max] |
Контактные лица с ЛТБИ (n=26), МE [min; max] |
P* | Пороговое значение |
Чувствите- льность, % |
Специфич- ность, % |
ППК** |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| IFNγAG, МЕ/мл (КФТ) |
6,4 [1,6; 10,2] |
1,7 [1,0; 3,6] |
0,008 | 4,3 | 56 | 81 | 0,71 |
| IFNγAG-NIL, МЕ/мл (КФТ) |
5,3 [1,2; 10,0] |
1,6 [0,7; 3,5] |
0,014 | 3,9 | 56 | 81 | 0,70 |
| TGFαNIL, пг/мл |
12,7 [10,0; 18,4] |
9,6 [5,6; 11,7] |
0,002 | 12,2 | 60 | 81 | 0,75 |
| TGFαAG, пг/мл |
17,3 [15,1; 20,5] |
12,5 [8,0; 15,1] |
0,000 | 15,6 | 67 | 81 | 0,80 |
| IFNα2AG, пг/мл |
7,4 [3,0; 11,5] |
3,0 [3,0; 3,0] |
0,041 | 6,0 | 56 | 81 | 0,66 |
| TNFαAG, пг/мл |
141,7 [86,0; 360,2] |
94,9 [39,7; 195,8] |
0,039 | 223,2 | 37 | 81 | 0,67 |
| sIL2-RαNIL, пг/мл |
18,6 [3,0; 46,9] |
3,0 [3,0; 11,0] |
0,006 | 13,7 | 63 | 81 | 0,72 |
| sIL2-RαAG, пг/мл |
30,0 [5,9; 76,7] |
3,0 [3,0; 13,2] |
0,005 | 26,3 | 56 | 81 | 0,73 |
| sIL2-RαAG-NIL, пг/мл |
6,7 [0,0; 13,0] |
0,0 [0,0; 13,1] |
0,041 | 4,2 | 52 | 81 | 0,66 |
| IL-6NIL, пг/мл |
627,7 [214,8; 1640,8] |
212,9 [125,3; 827,2] |
0,037 | 887,2 | 45 | 81 | 0,67 |
| IL-6AG, пг/мл |
1463,0 [650,7; 2973,6] |
604,7 [306,3; 1023,4] |
0,018 | 257,0 | 56 | 81 | 0,69 |
Примечание:
P* – достоверность различий между группой больных ТБ и контактных лиц с ЛТБИ;
**ППК – площадь под характеристической ROC-кривой.
Построение дерева решений в программе JMP 9.0. позволило выбрать комбинацию маркеров, обеспечивающую дискриминацию между больными ТБ и контактными лицами с ЛТБИ. В результате были выбраны три наиболее значимых маркера: IFNγAG-NIL, TGFαNIL и IL-6AG (пороговые значения 256 пг/мл (6,4 МЕ/мл); 17,0 пг/мл и 2039 пг/мл соответственно) и определены критерии включения лиц в исследуемые группы.
- Критерии отбора для больных активным ТБ: при одновременном определении содержания цитокинов IFNγAG-NIL, TGFαNIL и IL-6AG превышение порогового значения хотя бы одним из показателей.
- Критерии отбора для лиц с ЛТБИ: при одновременном определении содержания цитокинов IFNγAG-NIL, TGFαNIL и IL-6AG значения ниже пороговых по всем трем показателям.
Рисунок 3
Предложенные количественные критерии содержания цитокинов IFNγAG-NIL, TGFαNIL и IL-6AG в плазме крови выявляли 96,3 % (26 из 27) случаев активного туберкулеза и 80,7 % (21 из 26) случаев ЛТБИ (ППК=0,9). Мы проверили возможность использования данного алгоритма при сравнении больных ТБ и контактных лиц независимо от результатов КФТ и наличия бактериовыделения. Данный алгоритм позволил правильно идентифицировать 41 из 54 больных ТБ (чувствительность 76 %) и 35 из 47 контактных лиц (специфичность 75 %, ППК=0,8).
Каталог продукции 
