Разработка тест-системы для определения устойчивости Trichomonas vaginalis к противопротозойным препаратам

Цель

Для обеспечения стандартных условий при определении чувствительности T.vaginalis к противопротозойным препаратам предпринята попытка создания тест-системы путем подбора минимальных трихомоноцидных концентраций.

Материалы и методы

Субстанции производных 5-нитроимидазола (метронидазол, тинидазол, секнидазол, ниморазол, орнидазол, клотримазол) и нитруфурана (нифуратель) производства SIGMA-ALDRICH (USA) и ZXCHEM (Китай). Десять лабораторных штаммов T.vaginalis. Культуры выращивали на коммерческой питательной среде СВТ производства НИИЭМ имени Пастера (№ ФСР 2009/05982) до достижения логарифмической фазы роста.

Результаты и обсуждения

Для определения минимальных цидных концентраций противопротозойных препаратов готовили серийные разведения их растворов. Интервал концентраций для всех препаратов составил (0,5 – 20) мкг/мл. Полученные растворы вносили в лунки планшетов по 100 мкл. Планшеты высушивали в течение 24 ч при температуре 50 °С. Затем в лунки вносили по 200 мкл питательной среды и 100 мкл суспензии клеток (5 х 10⁴) T.vaginalis. Планшет заклеивали воздухонепроницаемой пленкой для создания анаэробных условий и инкубировали в течение 48 ч при температуре 37 °С. Критерием оценки чувствительности препарата служила минимальная цидная концентрация (МЦК), под которой понимали наименьшую концентрацию препарата, вызывающую гибель 100 % клеток трихомонад. Оценку жизнеспособности определяли по синей окраске трипановым синим мертвых клеток трихомонад и по отсутствию последующего пассирования штаммов на питательной среде. Все 10 штаммов T.vaginalis имели одинаковые значения МЦК для каждого препарата (мкг/мл): метронидазол (5), тинидазол (1), секнидазол (2), ниморазол (1), орнидазол (1), клотримазол (20), нифуратель (5).

Выбранные значения МЦК были использованы для конструирования коммерческой тест-системы "Трихомонас-ППЧ".

Все публикации