Опыт длительного культивирования и хранения Trichomonas vsginalis in vitro

Махлай Н.С., E-mail: natalia.makhlay@gmail.com.

• ФГУН НИИЭМ имени Пастера Роспотребнадзора.

Trichomonas vaginalis вследствие метаболитных особенностей является труднокультивируемым простейшим [1], тем не менее, культуральный метод по-прежнему остается "золотым стандартом" диагностики трихомониаза и напрямую зависит от качества используемых питательных сред. В связи с этим встает вопрос о контроле ростовых свойств среды, что является основной ее характеристикой качества. В НИИЭМ имени Пастера для серийного производства была разработана диагностическая питательная среда СВТ (№ ФСР 2009/05982) [2]. Целью настоящей работы явилась отработка условий длительного хранения трихомонад для контроля качества выпускаемых сред.

В работе использовали 10 клинических штаммов Trichomonas vaginalis, полученных из лаборатории иммунологии ФГУН НИИЭМ им. Пастера (г. Санкт-Петербург, РФ). Все культуры имели типичную для Trichomonas vaginalis морфологию, были активно подвижны. Все штаммы были положительны в ПЦР-РТ, проведенной с помощью тест-системы производства ИнтерЛабСервис (№ ФС 01262006/5190-06). Для длительного хранения штаммов Trichomonas vaginalis культуру, сконцентрированную на питательной среде до концентрации 10⁸ кл/мл, вносили (0,1 мл суспензии) в 0,9 мл свежей питательной среды СВТ с добавлением различных концентраций глицерина. После чего пробы сразу замораживали при температуре минус 70 °С. Восстановление культур осуществляли путем 10 минутного помещения пробирок в термостат при температуре 37 °С.

Известно, что Trichomonas vaginalis на питательной среде существует в грушевидной, овальной и амастиготоной формах. Все испытуемые штаммы на 1-2 сутки культивирования визуализировались преимущественно в виде грушевидной или округлой формах, все имели жгутики и совершали характерные толчкообразные движения. На третьи сутки наблюдалось максимальное накопление биомассы с наибольшим количеством грушевидных форм, а на 4-5 сутки культивирования трихомонады приобретали преимущественно малоподвижные и амастиготные формы с плохо различимым ядром и зернистой цитоплазмой. Однако при пересеве пятисуточной культуры на свежую питательную среду уже через 24 часа штамм восстанавливался и наблюдались только клетки с классической морфологией подвижностью. При ПЦР исследовании была выявлена ДНК Trichomonas vaginalis на всех сроках культивирования независимо от морфологических изменений на различных фазах жизненного цикла.

После хранения в условиях низкой температуры в течение месяца все культуры восстанавливались, сохраняли свою морфологию, подвижность и способность размножаться in vitro.

Таким образом, в результате работы была получена постоянная лабораторная коллекция из 10 культур Trichomonas vaginalis. Штаммы поддерживаются в питательной среде в концентрации 2 x 10⁶ кл/мл.

1. Клименко Б.В., Авазов Э.Р., Барановская В.Б., Степанова М.С. 2001. Трихомониаз мужчин, женщин и детей. СПб, Сюжет, 183 с.
2. Махлай Н.С. / Культивирование трихомонад на беcсывороточной питательной среде / Вербов В.Н., Березина Л.А. // Материалы пятого съезда общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова, Москва, 2008. - 276 c.

Все публикации